近年來，隨著人們生活水平的提高和衛生意識的增強，消毒劑的使用越來越普遍，尤其是在食品安全、醫療衛生和藥品生產行業。2010年版《藥品生產質量管理規范》（GMP)規定對廠房、潔凈區、排水系統、設備等清潔后需進行必要的消毒處理,并且設備消毒需規定消毒的具體方法、消毒劑的名稱和配制方法。但是GMP法規至今沒有對制藥企業消毒劑管理作詳細規定，筆者結合自身在藥企的工作心得和醫療系統相關法規要求，從液體消毒劑遴選原則和消毒效果驗證方法兩個方面，探討液體消毒劑驗證管理在制藥企業中的應用，為制藥企業的消毒劑管理提供參考。
1、液體消毒劑的概念和遴選原則
液體消毒劑是指某些能夠起到殺滅病原微生物并達到消毒要求的液體制劑。優質的液體消毒劑應具備殺死多種病原微生物、消毒能力強、作用迅速、無毒、無殘留、無腐蝕、無刺激,對人和動物無害,對環境污染程度低等特點。醫院外科手術最早使用的消毒藥水一石碳酸，是由英國外科醫生李斯特在調查污水溝里長滿水草和浮萍的原因時意外發現的。此后,漂******、戊二醛、苯扎氯銨、碘酊和乙醇等一系列液體消毒劑相繼被發現。液體消毒劑在制藥企業主要應用于廠房環境消毒、手消毒和生產設備清潔后消毒等方面。
液體消毒劑的遴選原則。
一是遴選依據,2010年版GMP并未對液體消毒劑的遴選做詳細的規定，但為確保藥品生產環境、人員衛生符合無菌要求以防止其對藥品造成污染，制藥企業的液體消毒劑遴選主要參考了《醫務人員手衛生規范》（2009)和《醫療機構消毒技術規范》（2012)。
二是遴選類別,應當選用目前醫藥企業內部普遍接受并已證明有效的消毒劑類別。
三是消毒劑的生產廠家，必須是獲得國務院或省級衛生行政管理生產許可、并持有生產許可證的廠家。
第四是消毒劑產品的外包裝,必須標明品名、廠名、生產批號、有效期、批準文號、有效成分、有效濃度和使用方法等信息。
2、液體消毒劑的驗證管理
驗證是指證明按照預先設定的操作規范、工藝或方法能夠生產出滿足預期結果或者達到相應法規要求產品的一系列活動。2010年版GMP第143條規定制藥企業的清潔方法驗證過程中應當綜合考慮清潔劑和消毒劑、取樣方法和位置等內容,證實清潔的效果,有效防止污染和交叉污染的發生；并于2015年頒發了附錄11對相關內容做了詳細規定。但是對于消毒劑的選擇和消毒效果的驗證并無明確的規定。為了確保液體消毒劑在制藥企業日常生產中的消毒效果，規范其日常管理，使其有效、有序地開展，筆者結合多年來在制藥企業的工作經驗建議從以下幾個方面來開展驗證工作。
2.1消毒劑有效成分含量的測定消毒劑的有效成分是指消毒劑中對細菌孢子、繁殖體、真菌、病毒等具有殺滅作用的成分,決定消毒劑消毒效果的強弱。常見的方法有比重法、相對密度測定法和儀器分析法（如色譜、光學和電化學分析方法）。比重法主要用于僅由水和乙醇組成的消毒劑，如75%乙醇和95%乙醇的配制。相對密度法常用于異丙醇消毒液的配制，如68%異丙醇和70%異丙醇消毒液的配制。而儀器分析法一般用于復方消毒產品的含量測定。
2.2消毒劑消毒能力的實驗室評價消毒劑消毒能力的實驗室評價一般選用待評價消毒劑對某一代表性微生物的最低使用濃度或企業常用濃度為實驗濃度；以說明書規定最短作用時間的0.5,1.0和1.5倍為實驗時間；采用的評價方法包括中和劑實驗法和定量殺菌實驗法。
2.2.1中和劑實驗法中和劑是指既能有效抑制消毒劑殺菌能力又不削弱微生物活力的試劑，可準確反映使用中消毒劑受微生物污染的狀況[2],所有消毒劑在使用之前都需做本項檢測。中和劑檢測中所用的菌種有金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白念珠菌和大腸埃希菌，使用之前都需經過菌種鑒定。首先，配制實驗方案所需濃度的消毒劑、中和劑和實驗菌株；其次，將實驗分成中和劑毒性組（Nc,用于檢測中和劑對微生物的抑制/殺滅作用）、中和產物組（Nt,驗證中和劑與消毒劑適當比例混合后產物對微生物的抑制/殺滅作用）、空白對照組（No,驗證無中和劑/消毒劑條件下反應液中的微生物數量），并按方案要求制備得到相應的反應液萬方數將各實驗組反應液涂于無菌培養液上培養一段時間后,每個實驗組選取兩個合適濃度梯度(都應處在30~300cfu之間）平板計數，分別計為a和a1,然后按下式計算：
d為溶液稀釋倍數,Nc、Nt和No分別代表中和劑組、中和產物組和空白對照組中菌落數。判定標準為：當-0.3≤No-Nc≤0.3且-0.3≤No-Nt≤0.3時,表明中和劑對消毒劑具有很好的中和作用,但對細菌恢復培養無影響，即認為通過實驗。
2.2.2定量殺菌實驗定量殺菌實驗是指用消毒劑殺滅懸浮液中一定劑量的細菌繁殖體和孢子，以評價消毒劑的消毒效果。常用的方法有懸液定量法和載體噴霧定量法，其中載體噴霧定量法適用于不宜用懸液定量法評價的消毒劑,如黏稠的消毒劑和沖洗消毒的消毒劑。
懸液定量法：首先，可配制一定濃度（如濃度為10^9cfu·mL^-1)的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌和白念珠菌的實驗菌液。吸取各菌液10μL均勻涂布于已消毒滅菌的不銹鋼板上,層流吹干。其次,選取消毒劑使用說明書上的最低濃度以3個不同作用時間（說明書規定最短作用時間的0.5,1.0和1.5倍)對平板進行消毒,平行做對照實驗（以0.9%氯化鈉溶液代替消毒劑）。第三,將實驗組（Kl)和對照組（Kc)進行取樣,取樣液涂布于無菌培養液上培養一段時間,檢測各種菌的生長狀況,計算菌落數（N),從而評價消毒劑的消毒效果。
載體噴霧定量殺菌實驗:首先,配制一定濃度（如10^9cfu·mL^-1)的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希囷和白念珠囷的實驗囷液。其次,分別取3片每種標準菌染后菌片以等邊三角形陣列形式均勻排布于一個無菌玻璃板上。第三,用同一濃度消毒劑溶液均勻噴灑于上述菌片上,但不能使菌片濕透和流液。第四,待消毒劑與菌片作用一段時間后,將每個菌片分別放人一個無菌試管內,加人一定量中和劑渦旋20s,使細菌洗脫人中和液中。吸取洗液1.0mL于無菌培養皿（每管2個皿）中培養一段時間后計算菌落數(Nk)。以制藥用水為對照組做平行實驗（Nc)。計算殺滅對數值(KL)：
Log10Ne和Log10Nk分別為對照組和實驗組菌落數的對數值。判定標準為：當KL≥3時表明滅菌效果符合標準。
2.3消毒效果的現場或模擬現場評價現場或模擬現場評價消毒劑在實際使用條件下的消毒效果，主要包括潔凈區表面和手消毒兩個方面，原則上選擇類似物品中最難達到消毒合格的部位（如手的五指屈面），但是對于特指消毒對象時應選擇該特指對象進行實驗。所用消毒劑濃度和時間一般為產品說明書規定的最低使用濃度和最短作用時間。
2.3.1消毒劑對潔凈區表面消毒模擬實驗模擬實驗對象應選擇常用的材質載體,如彩砂、環氧地坪、不銹鋼、彩鋼板、聚氯乙烯、玻璃、硅膠、塑料薄膜等；實驗菌種與評價的消毒劑有關，如殺孢子劑選擇枯草芽孢桿菌,而一般消毒劑可選用金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、白念珠菌等。具體步驟如下:首先,準備6cmx6cm的各材質載體（除塑料薄膜)5塊（實驗組3塊、對照組和空白對照組各1塊）。實驗前清洗并進行濕熱滅菌后密封傳遞至潔凈操作區。其次，在實驗組、對照組每塊平面載體上滴加標準菌種菌懸液(10^7?10^8cfu-mL-l)0.1mL,并用接種環平均涂抹于約5cmx5cm的方形面積內后晾干。對實驗組已接種過的平面載體噴灑消毒劑,噴灑應無死角，待消毒劑達到指定作用時間時，對3塊平面載體進行取樣。對照組和空白對照組不做處理，直接擦拭取樣。第三，分別取實驗組、對照組和空白對照組樣品1mL與4mL中和劑混合一定時間后，取1mL接種于無菌培養皿上,置于恒溫培養箱內培養,統計菌落數。實驗結果應為:空白對照組菌落數為0,實驗組有少量或無菌落生長,對照組有大量菌落生長；且所有樣本的殺滅對數值均為3.00,可判為消毒合格。
2.3.2潔凈區手消毒效果驗證手消毒是人員在潔凈區內最頻繁的操作步驟，消毒效果的好壞對潔凈區環境的維持以及無菌產品質量的保證至關重要。因此,消毒劑正式投人使用前進行手消毒效果驗證十分重要。具體步驟如下:首先,選擇3名裸手受試者，先噴灑0.9%氯化鈉溶液,雙手摩擦20s后用無菌棉簽進行擦拭取樣。將取樣棉簽與手接觸部位剪去置于0.9%氯化鈉溶液10mL中作為對照樣品。其次,對手進行無死角噴灑消毒，1min后用棉簽擦拭取樣作為實驗組樣品。實驗過程中擦拭力度、棉簽大小和吸取的采樣液應保持一致。第三,分別取1mL實驗組、對照組和空白對照組(0.9%氯化鈉溶液）樣品與中和劑4mL混合一定時間后，各取1mL接種于無菌培養皿上,置于恒溫培養箱內培養,統計菌落數,每個實驗重復3次。實驗結果應為空白對照組菌落數為0,實驗組有少量或無菌落生長,而對照組有大量菌落生長；且各樣本平均殺滅對數值為1.00可判為消毒合格。
2.4儲存期限驗證消毒劑存儲期限的驗證主要包括外觀檢查、有效殺菌成分含量測定和微生物測定。首先，按照消毒劑使用說明書和保存期限要求配制適當液體消毒劑,存儲于規定容器中。其次,在保存期限前后和當天分別取樣，檢測外觀應無顏色變化,無沉淀和懸浮物；有效殺菌成分的含量應不低于產品說明書上的最低有效濃度；且消毒劑溶液中應無微生物存在。
隨著液體消毒劑技術的不斷發展和制藥企業GMP管理推行的不斷深人，作為藥品生產過程中廠房環境、設備和人員消毒必不可少的液體消毒劑種類將會越來越多,其使用和管理將引起人們的普遍關注。制定液體消毒劑消毒效果的驗證管理規程不僅可以規范其使用程序和確保消毒效果,而且又是確保藥品生產環境的穩定和無菌，保證藥品質量和用藥安全,以防污染和交叉污染產生的重要措施。
近年來，隨著人們生活水平的提高和衛生意識的增強，消毒劑的使用越來越普遍，尤其是在食品安全、醫療衛生和藥品生產行業。2010年版《藥品生產質量管理規范》（GMP)規定對廠房、潔凈區、排水系統、設備等清潔后需進行必要的消毒處理,并且設備消毒需規定消毒的具體方法、消毒劑的名稱和配制方法。但是GMP法規至今沒有對制藥企業消毒劑管理作詳細規定，筆者結合自身在藥企的工作心得和醫療系統相關法規要求，從液體消毒劑遴選原則和消毒效果驗證方法兩個方面，探討液體消毒劑驗證管理在制藥企業中的應用，為制藥企業的消毒劑管理提供參考。
1、液體消毒劑的概念和遴選原則
液體消毒劑是指某些能夠起到殺滅病原微生物并達到消毒要求的液體制劑。優質的液體消毒劑應具備殺死多種病原微生物、消毒能力強、作用迅速、無毒、無殘留、無腐蝕、無刺激,對人和動物無害,對環境污染程度低等特點。醫院外科手術最早使用的消毒藥水一石碳酸，是由英國外科醫生李斯特在調查污水溝里長滿水草和浮萍的原因時意外發現的。此后,漂******、戊二醛、苯扎氯銨、碘酊和乙醇等一系列液體消毒劑相繼被發現。液體消毒劑在制藥企業主要應用于廠房環境消毒、手消毒和生產設備清潔后消毒等方面。
液體消毒劑的遴選原則。
一是遴選依據,2010年版GMP并未對液體消毒劑的遴選做詳細的規定，但為確保藥品生產環境、人員衛生符合無菌要求以防止其對藥品造成污染，制藥企業的液體消毒劑遴選主要參考了《醫務人員手衛生規范》（2009)和《醫療機構消毒技術規范》（2012)。
二是遴選類別,應當選用目前醫藥企業內部普遍接受并已證明有效的消毒劑類別。
三是消毒劑的生產廠家，必須是獲得國務院或省級衛生行政管理生產許可、并持有生產許可證的廠家。
第四是消毒劑產品的外包裝,必須標明品名、廠名、生產批號、有效期、批準文號、有效成分、有效濃度和使用方法等信息。
2、液體消毒劑的驗證管理
驗證是指證明按照預先設定的操作規范、工藝或方法能夠生產出滿足預期結果或者達到相應法規要求產品的一系列活動。2010年版GMP第143條規定制藥企業的清潔方法驗證過程中應當綜合考慮清潔劑和消毒劑、取樣方法和位置等內容,證實清潔的效果,有效防止污染和交叉污染的發生；并于2015年頒發了附錄11對相關內容做了詳細規定。但是對于消毒劑的選擇和消毒效果的驗證并無明確的規定。為了確保液體消毒劑在制藥企業日常生產中的消毒效果，規范其日常管理，使其有效、有序地開展，筆者結合多年來在制藥企業的工作經驗建議從以下幾個方面來開展驗證工作。
2.1消毒劑有效成分含量的測定消毒劑的有效成分是指消毒劑中對細菌孢子、繁殖體、真菌、病毒等具有殺滅作用的成分,決定消毒劑消毒效果的強弱。常見的方法有比重法、相對密度測定法和儀器分析法（如色譜、光學和電化學分析方法）。比重法主要用于僅由水和乙醇組成的消毒劑，如75%乙醇和95%乙醇的配制。相對密度法常用于異丙醇消毒液的配制，如68%異丙醇和70%異丙醇消毒液的配制。而儀器分析法一般用于復方消毒產品的含量測定。
2.2消毒劑消毒能力的實驗室評價消毒劑消毒能力的實驗室評價一般選用待評價消毒劑對某一代表性微生物的最低使用濃度或企業常用濃度為實驗濃度；以說明書規定最短作用時間的0.5,1.0和1.5倍為實驗時間；采用的評價方法包括中和劑實驗法和定量殺菌實驗法。
2.2.1中和劑實驗法中和劑是指既能有效抑制消毒劑殺菌能力又不削弱微生物活力的試劑，可準確反映使用中消毒劑受微生物污染的狀況[2],所有消毒劑在使用之前都需做本項檢測。中和劑檢測中所用的菌種有金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白念珠菌和大腸埃希菌，使用之前都需經過菌種鑒定。首先，配制實驗方案所需濃度的消毒劑、中和劑和實驗菌株；其次，將實驗分成中和劑毒性組（Nc,用于檢測中和劑對微生物的抑制/殺滅作用）、中和產物組（Nt,驗證中和劑與消毒劑適當比例混合后產物對微生物的抑制/殺滅作用）、空白對照組（No,驗證無中和劑/消毒劑條件下反應液中的微生物數量），并按方案要求制備得到相應的反應液萬方數將各實驗組反應液涂于無菌培養液上培養一段時間后,每個實驗組選取兩個合適濃度梯度(都應處在30~300cfu之間）平板計數，分別計為a和a1,然后按下式計算：
d為溶液稀釋倍數,Nc、Nt和No分別代表中和劑組、中和產物組和空白對照組中菌落數。判定標準為：當-0.3≤No-Nc≤0.3且-0.3≤No-Nt≤0.3時,表明中和劑對消毒劑具有很好的中和作用,但對細菌恢復培養無影響，即認為通過實驗。
2.2.2定量殺菌實驗定量殺菌實驗是指用消毒劑殺滅懸浮液中一定劑量的細菌繁殖體和孢子，以評價消毒劑的消毒效果。常用的方法有懸液定量法和載體噴霧定量法，其中載體噴霧定量法適用于不宜用懸液定量法評價的消毒劑,如黏稠的消毒劑和沖洗消毒的消毒劑。
懸液定量法：首先，可配制一定濃度（如濃度為10^9cfu·mL^-1)的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌和白念珠菌的實驗菌液。吸取各菌液10μL均勻涂布于已消毒滅菌的不銹鋼板上,層流吹干。其次,選取消毒劑使用說明書上的最低濃度以3個不同作用時間（說明書規定最短作用時間的0.5,1.0和1.5倍)對平板進行消毒,平行做對照實驗（以0.9%氯化鈉溶液代替消毒劑）。第三,將實驗組（Kl)和對照組（Kc)進行取樣,取樣液涂布于無菌培養液上培養一段時間,檢測各種菌的生長狀況,計算菌落數（N),從而評價消毒劑的消毒效果。
載體噴霧定量殺菌實驗:首先,配制一定濃度（如10^9cfu·mL^-1)的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希囷和白念珠囷的實驗囷液。其次,分別取3片每種標準菌染后菌片以等邊三角形陣列形式均勻排布于一個無菌玻璃板上。第三,用同一濃度消毒劑溶液均勻噴灑于上述菌片上,但不能使菌片濕透和流液。第四,待消毒劑與菌片作用一段時間后,將每個菌片分別放人一個無菌試管內,加人一定量中和劑渦旋20s,使細菌洗脫人中和液中。吸取洗液1.0mL于無菌培養皿（每管2個皿）中培養一段時間后計算菌落數(Nk)。以制藥用水為對照組做平行實驗（Nc)。計算殺滅對數值(KL)：
Log10Ne和Log10Nk分別為對照組和實驗組菌落數的對數值。判定標準為：當KL≥3時表明滅菌效果符合標準。
2.3消毒效果的現場或模擬現場評價現場或模擬現場評價消毒劑在實際使用條件下的消毒效果，主要包括潔凈區表面和手消毒兩個方面，原則上選擇類似物品中最難達到消毒合格的部位（如手的五指屈面），但是對于特指消毒對象時應選擇該特指對象進行實驗。所用消毒劑濃度和時間一般為產品說明書規定的最低使用濃度和最短作用時間。
2.3.1消毒劑對潔凈區表面消毒模擬實驗模擬實驗對象應選擇常用的材質載體,如彩砂、環氧地坪、不銹鋼、彩鋼板、聚氯乙烯、玻璃、硅膠、塑料薄膜等；實驗菌種與評價的消毒劑有關，如殺孢子劑選擇枯草芽孢桿菌,而一般消毒劑可選用金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、白念珠菌等。具體步驟如下:首先,準備6cmx6cm的各材質載體（除塑料薄膜)5塊（實驗組3塊、對照組和空白對照組各1塊）。實驗前清洗并進行濕熱滅菌后密封傳遞至潔凈操作區。其次，在實驗組、對照組每塊平面載體上滴加標準菌種菌懸液(10^7?10^8cfu-mL-l)0.1mL,并用接種環平均涂抹于約5cmx5cm的方形面積內后晾干。對實驗組已接種過的平面載體噴灑消毒劑,噴灑應無死角，待消毒劑達到指定作用時間時，對3塊平面載體進行取樣。對照組和空白對照組不做處理，直接擦拭取樣。第三，分別取實驗組、對照組和空白對照組樣品1mL與4mL中和劑混合一定時間后，取1mL接種于無菌培養皿上,置于恒溫培養箱內培養,統計菌落數。實驗結果應為:空白對照組菌落數為0,實驗組有少量或無菌落生長,對照組有大量菌落生長；且所有樣本的殺滅對數值均為3.00,可判為消毒合格。
2.3.2潔凈區手消毒效果驗證手消毒是人員在潔凈區內最頻繁的操作步驟，消毒效果的好壞對潔凈區環境的維持以及無菌產品質量的保證至關重要。因此,消毒劑正式投人使用前進行手消毒效果驗證十分重要。具體步驟如下:首先,選擇3名裸手受試者，先噴灑0.9%氯化鈉溶液,雙手摩擦20s后用無菌棉簽進行擦拭取樣。將取樣棉簽與手接觸部位剪去置于0.9%氯化鈉溶液10mL中作為對照樣品。其次,對手進行無死角噴灑消毒，1min后用棉簽擦拭取樣作為實驗組樣品。實驗過程中擦拭力度、棉簽大小和吸取的采樣液應保持一致。第三,分別取1mL實驗組、對照組和空白對照組(0.9%氯化鈉溶液）樣品與中和劑4mL混合一定時間后，各取1mL接種于無菌培養皿上,置于恒溫培養箱內培養,統計菌落數,每個實驗重復3次。實驗結果應為空白對照組菌落數為0,實驗組有少量或無菌落生長,而對照組有大量菌落生長；且各樣本平均殺滅對數值為1.00可判為消毒合格。
2.4儲存期限驗證消毒劑存儲期限的驗證主要包括外觀檢查、有效殺菌成分含量測定和微生物測定。首先，按照消毒劑使用說明書和保存期限要求配制適當液體消毒劑,存儲于規定容器中。其次,在保存期限前后和當天分別取樣，檢測外觀應無顏色變化,無沉淀和懸浮物；有效殺菌成分的含量應不低于產品說明書上的最低有效濃度；且消毒劑溶液中應無微生物存在。
隨著液體消毒劑技術的不斷發展和制藥企業GMP管理推行的不斷深人，作為藥品生產過程中廠房環境、設備和人員消毒必不可少的液體消毒劑種類將會越來越多,其使用和管理將引起人們的普遍關注。制定液體消毒劑消毒效果的驗證管理規程不僅可以規范其使用程序和確保消毒效果,而且又是確保藥品生產環境的穩定和無菌，保證藥品質量和用藥安全,以防污染和交叉污染產生的重要措施。
