分析方法驗(yàn)證—主要內(nèi)容? 主要內(nèi)容：
? 1.法規(guī)要求
? 2.定義、適用范圍、目的和發(fā)起時(shí)機(jī)
? 3.驗(yàn)證的分析項(xiàng)目
? 4.驗(yàn)證的指標(biāo)
? 5.舉例（略）
第十二條 質(zhì)量控制的基本要求：
（四）檢驗(yàn)方法應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證或確認(rèn)；
第一百三十九條 企業(yè)的廠房、設(shè)施、設(shè)備和檢驗(yàn)儀器應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)確認(rèn)，應(yīng)當(dāng)采用經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的生產(chǎn)工藝、操作規(guī)程和檢驗(yàn)方法進(jìn)行生產(chǎn)、操作和檢驗(yàn)，并保持持續(xù)的驗(yàn)證狀態(tài)。
第一百四十二條 當(dāng)影響產(chǎn)品質(zhì)量的主要因素，如原輔料、與藥品直接接觸的包裝材料、生產(chǎn)設(shè)備、生產(chǎn)環(huán)境（或廠房）、生產(chǎn)工藝、檢驗(yàn)方法等發(fā)生變更時(shí)，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行確認(rèn)或驗(yàn)證。必要時(shí)，還應(yīng)當(dāng)經(jīng)藥品監(jiān)督管理部門(mén)批準(zhǔn)。
第一百四十三條 清潔方法應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，證實(shí)其清潔的效果，以有效防止污染和交叉污染。清潔驗(yàn)證應(yīng)當(dāng)綜合考慮設(shè)備使用情況、所使用的清潔劑和消毒劑、取樣方法和位置以及相應(yīng)的取樣回收率、殘留物的性質(zhì)和限度、殘留物檢驗(yàn)方法的靈敏度等因素。
分析方法驗(yàn)證—法規(guī)要求（2/3）第一百四十九條 應(yīng)當(dāng)根據(jù)驗(yàn)證的結(jié)果確認(rèn)工藝規(guī)程和操作規(guī)程。
第二百二十三條 物料和不同生產(chǎn)階段產(chǎn)品的檢驗(yàn)應(yīng)當(dāng)至少符合以下要求：
（一）企業(yè)應(yīng)當(dāng)確保藥品按照注冊(cè)批準(zhǔn)的方法進(jìn)行全項(xiàng)檢驗(yàn)；
（二）符合下列情形之一的，應(yīng)當(dāng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證：
1.采用新的檢驗(yàn)方法;
2.檢驗(yàn)方法需變更的；
3.采用《中華人民共和國(guó)藥典》及其他法定標(biāo)準(zhǔn)未收載的檢驗(yàn)方法；
4.法規(guī)規(guī)定的其他需要驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法。
（三）對(duì)不需要進(jìn)行驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法，企業(yè)應(yīng)當(dāng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)，以確保檢驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可靠；
（四）檢驗(yàn)應(yīng)當(dāng)有書(shū)面操作規(guī)程，規(guī)定所用方法、儀器和設(shè)備，檢驗(yàn)操作規(guī)程的內(nèi)容應(yīng)當(dāng)與經(jīng)確認(rèn)或驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法一致；
分析方法驗(yàn)證—法規(guī)要求（3/3）第二百三十條 產(chǎn)品的放行應(yīng)當(dāng)至少符合以下要求：
（一）在批準(zhǔn)放行前，應(yīng)當(dāng)對(duì)每批藥品進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，保證藥品及其生產(chǎn)應(yīng)當(dāng)符合注冊(cè)和本規(guī)范要求，并確認(rèn)以下各項(xiàng)內(nèi)容：
1.主要生產(chǎn)工藝和檢驗(yàn)方法經(jīng)過(guò)驗(yàn)證；
分析方法驗(yàn)證—定義、適用范圍、目的和發(fā)起時(shí)機(jī)（1/2）? 方法驗(yàn)證定義
? 國(guó)際：ICHQ2（R1）：是闡明分析方法適用于它所期望的應(yīng)用目的。
? 美國(guó)：FDA工業(yè)指南/USP（1225）
FDA:是一個(gè)闡述分析方法適合于其使用目的的過(guò)程。
USP：是一個(gè)按照已創(chuàng)建的實(shí)驗(yàn)室研究來(lái)證明方法的性能參數(shù)符合期望的分析應(yīng)用的過(guò)程。
? 國(guó)內(nèi)：SFDA/ChP
SFDA:證明任何操作規(guī)程（或方法），生產(chǎn)工藝或系統(tǒng)能夠達(dá)到預(yù)期結(jié)果的一系列活動(dòng)。
ChP（9101）：證明采用的方法適合于相應(yīng)的要求。
1.任何分析檢測(cè)的目的都是為了獲得穩(wěn)定、可靠和準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，方法驗(yàn)證在其中起著極為重要的作用。
2.是對(duì)標(biāo)準(zhǔn)中擬采用的分析方法是否能達(dá)到預(yù)期目的。
3.證明由分析方法誤差而導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果判斷錯(cuò)誤的概率是否在允許范圍之內(nèi)，而進(jìn)行的科學(xué)證明。
分析方法驗(yàn)證—定義、適用范圍、目的和發(fā)起時(shí)機(jī)（2/2）? 適用范圍、目的和發(fā)起時(shí)機(jī)內(nèi)容 適用范圍 目的 發(fā)起時(shí)機(jī)
方法驗(yàn)證 1.采用新的檢驗(yàn)方法；2.檢驗(yàn)方法需變更的；3.采用《中國(guó)藥典》及其他法定標(biāo)準(zhǔn)未收載的檢驗(yàn)方法；4.法規(guī)規(guī)定的其他需要驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法；
證明采用方法適合相應(yīng)檢測(cè)要求
1.創(chuàng)建質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)；2.在藥品生產(chǎn)工藝變更、制劑的組分變更、原分析方法修訂時(shí)；
方法確認(rèn) 1.不需要進(jìn)行驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法；2.藥典方法和其他法定方法；
確認(rèn)方法在本實(shí)驗(yàn)室條件下的適用性
在實(shí)驗(yàn)室批準(zhǔn)使用該方法前
方法轉(zhuǎn)移 將分析方法由A實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)移到B實(shí)驗(yàn)室
確認(rèn)采用的方法在B實(shí)驗(yàn)室條件下的適用性
在B實(shí)驗(yàn)室批準(zhǔn)使用該方法前
分析方法驗(yàn)證—驗(yàn)證的分析項(xiàng)目? 需要驗(yàn)證的分析項(xiàng)目：鑒別試驗(yàn)、雜質(zhì)測(cè)定（限度或定量分析）、含量測(cè)定和特性參數(shù)
（如：溶出度、釋放度、含量均勻度等）
? 鑒別的目的在于判定被分析物是目標(biāo)化合物，而非其他物質(zhì)。用于鑒別的分析方法要求具有較強(qiáng)的專(zhuān)屬性和耐用性。
? 雜質(zhì)檢查主要用于控制主成分以外的雜質(zhì)，如無(wú)機(jī)、有機(jī)雜質(zhì)等。雜質(zhì)檢查分為限度檢查和定量測(cè)定兩部分。用于限度檢查的分析方法驗(yàn)證側(cè)重專(zhuān)屬性、檢測(cè)限和耐用性。用于定量測(cè)定的分析方法驗(yàn)證強(qiáng)調(diào)專(zhuān)屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性、范圍、定量限和耐用性。
? 含量測(cè)定對(duì)準(zhǔn)確度要求較高，因此所采用的分析方法要求具有一定的專(zhuān)屬性、準(zhǔn)確度和線性等的要求。
? 不需要驗(yàn)證的分析項(xiàng)目：對(duì)于僅需要按照實(shí)驗(yàn)室日常測(cè)試操作步驟即可測(cè)定的檢驗(yàn)項(xiàng)目不需要進(jìn)行驗(yàn)證，如外觀、崩解時(shí)限、密度、重量、pH值、灰分、裝量等等。
分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（內(nèi)容）? 驗(yàn)證的指標(biāo)：
? 專(zhuān)屬性
? 準(zhǔn)確度
? 精密度（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）
? 檢測(cè)限
? 定量限
? 線性
? 范圍
? 耐用性
分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（項(xiàng)目與指標(biāo)關(guān)系表）? 分析項(xiàng)目與相應(yīng)的驗(yàn)證指標(biāo)見(jiàn)下表：
分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（專(zhuān)屬性）? 專(zhuān)屬性：系指在其他成分（如雜質(zhì)、輔料等）可能存在下，采用的分析方法能正確測(cè)定出被測(cè)物
的能力。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定方法，均應(yīng)考察其專(zhuān)屬性。
? 評(píng)價(jià)方法：
1.分離度：以分離度（試驗(yàn)）溶液試驗(yàn)，分離度應(yīng)符合要求；
2.陰性試樣：以不含被測(cè)成分的供試品（除去含待測(cè)成分藥物或不含待測(cè)成分的模擬處方，通常稱為陰性試驗(yàn)）試驗(yàn)
3.共存物：在共存物（或雜質(zhì)）可獲得的情況下，試樣中可加入共存物，考察測(cè)定結(jié)果是否受干擾；
4.方法比較：測(cè)定可能含有共存物如雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的供試品，與用另一個(gè)經(jīng)驗(yàn)證的方法或藥典方法測(cè)定結(jié)果比較；
5.色譜峰純度：用光二極管陣列檢測(cè)器（DAD）和質(zhì)譜檢測(cè)器進(jìn)行峰純度檢查；
分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（準(zhǔn)確度）? 準(zhǔn)確度:系指用所創(chuàng)建的方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率（%）表
示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的線性范圍內(nèi)測(cè)定試驗(yàn)。準(zhǔn)確度也可由所測(cè)定的精密度、線性和專(zhuān)屬性推算出來(lái)。
? 評(píng)價(jià)方法：（化學(xué)藥含量測(cè)定、化學(xué)藥雜質(zhì)定量、中藥化學(xué)成分測(cè)定的準(zhǔn)確度）
1.加樣回收（回收率試驗(yàn)是評(píng)價(jià)準(zhǔn)確度最為常用、較為簡(jiǎn)單的方法之一）：（1）模擬樣品（空白輔料和對(duì)照品）；（2）標(biāo)準(zhǔn)加入法（在樣品中加入對(duì)照品）；
2.非加樣回收（在無(wú)法或無(wú)必要加樣回收試驗(yàn)）：（1）測(cè)試對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）；（2）由精密度、線性和專(zhuān)屬性數(shù)據(jù)來(lái)評(píng)價(jià)；（3）與已知準(zhǔn)確度的標(biāo)準(zhǔn)方法比較；
? 數(shù)據(jù)要求：
1.用同一濃度平行6份測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)；或高、中、低3個(gè)不同濃度，分別制備3份供試品溶液，用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。
2.應(yīng)報(bào)告已知加入量的回收率（%），或測(cè)定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差或置信區(qū)間（置信度一般為95%）。
3.在基質(zhì)復(fù)雜、組分含量低于0.01%及多成分等分析中，回收率限度可適當(dāng)放寬。
4.樣品中待測(cè)定成分含量與回收率限度表（略）—來(lái)源為美國(guó)藥典論壇PF39（6）（1200）中，準(zhǔn)確度可接受標(biāo)準(zhǔn)公式為：回收率=100%±2C – 0 . 1 5 0 5%，其中C為待測(cè)成分含量。（美國(guó)AOAC指導(dǎo)原則）
分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（精密度）? 精密度：系指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一份均勻的供試品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近
程度。精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性。
? 評(píng)價(jià)方法：
1.重復(fù)性：a.在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度（相當(dāng)于100%濃度水平）的供試品，用至少測(cè)定6次的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)；b.設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度分別制備3份供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)（考慮樣品濃度范圍）；
2.中間精密度：為考察隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響。變動(dòng)因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備。
3.重現(xiàn)性：通過(guò)不同實(shí)驗(yàn)室協(xié)同檢驗(yàn)獲得重現(xiàn)性結(jié)果。
?數(shù)據(jù)要求：
1.應(yīng)報(bào)告偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差或置信區(qū)間。
2.樣品中待測(cè)定成分含量和精密度RSD可接受范圍參考表（略），計(jì)算公式，重復(fù)性：RSD r=C – 0 . 1 5 0 5；重現(xiàn)性：RSDR=2C – 0 . 1 5 0 5，其中C為待測(cè)定成分含量（公式來(lái)源美國(guó)AOAC指導(dǎo)原準(zhǔn)則）。可接受范圍可在給出數(shù)值0.5—2倍區(qū)間。
3.在基質(zhì)復(fù)雜、組分含量低于0.01%及多成分等分析中，精密度限度可適當(dāng)放寬。
分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（檢測(cè)限和定量限）? 檢測(cè)限（LOD）：系指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量，不必準(zhǔn)確定量。
? 定量限（LOQ）：系指試樣中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)符合準(zhǔn)確度和精密度要求。
? 評(píng)價(jià)方法：
1.直觀法：用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出被可靠地檢測(cè)（定量）的最低濃度和量。
2.信噪比法：一般以信噪比為3:1或10:1時(shí)相對(duì)應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限和定量限。
3.基于響應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率法。（公式略）
分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（線性）? 線性：系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，檢測(cè)結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈比例關(guān)系的程度。
? 評(píng)價(jià)方法：
1.應(yīng)在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)測(cè)定線性關(guān)系。
2.可用同一對(duì)照品（或工作對(duì)照品）貯備液經(jīng)精密稀釋?zhuān)蚍謩e精密稱取同一對(duì)照品（或工作對(duì)照品），制備一系列對(duì)照品（或工作對(duì)照品）溶液的方法進(jìn)行測(cè)定，至少制備5份測(cè)試樣品。以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。
?數(shù)據(jù)要求：
1.線性范圍要足夠?qū)挘员ＷC供試品溶液中待測(cè)成分的濃度（或量）落在線性范圍內(nèi)，且最好處于線性曲線的中間部分。
2.線性范圍最低點(diǎn)的濃度不得低于方法的定量限。
3.常量測(cè)定：回歸曲線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.998，Y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的2%以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。
4.微量測(cè)定：回歸曲線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.990，Y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的25%以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10%。
5.應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)、各濃度點(diǎn)誤差、殘差平方和和線性圖（或其他數(shù)學(xué)模型）。
分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（范圍）? 范圍：系指分析方法能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性要求時(shí)高低限濃度或量的區(qū)間。
? 確定依據(jù)：a.應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用及其線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果和要求確定。b.線性范圍應(yīng)足夠?qū)挘瑧?yīng)能覆蓋實(shí)際供試品的全部待測(cè)濃度，和準(zhǔn)確度、精密度試驗(yàn)的濃度范圍。
1.原料藥和制劑含量測(cè)定，范圍一般為測(cè)定濃度的80%—120%；
2.制劑含量均勻度檢查，范圍一般為測(cè)定濃度的70%—130%；
3.溶出度和釋放度中的溶出量測(cè)定，范圍一般為限度的±30%，如規(guī)定了限度范圍，則應(yīng)為下限的-20%至上限的+20%；
4.雜質(zhì)測(cè)定，范圍應(yīng)根據(jù)初步實(shí)際測(cè)定數(shù)據(jù)，擬定為規(guī)定限度的±20%。
分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（耐用性）? 耐用性：系指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，為所創(chuàng)建的方法用于常
規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。
? 評(píng)價(jià)方法：
1.創(chuàng)建分析方法時(shí)，就應(yīng)考慮其耐用性。
2.如果測(cè)試條件要求苛刻，則應(yīng)在方法中寫(xiě)明，并注明可以接受變動(dòng)的范圍。
3.先采用均勻設(shè)計(jì)確定主要影響因素，再通過(guò)單因素分析等確定變動(dòng)因素。
?典型的變動(dòng)因素：
1.被測(cè)溶液的穩(wěn)定性、提取的完全性；
2.色譜系統(tǒng)的耐用性：色譜柱的變化、柱溫、緩沖液濃度的變化、組分變化、pH值的變化、流速等；
?結(jié)果要求：經(jīng)試驗(yàn)，測(cè)定條件小的變動(dòng)應(yīng)能滿足系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求，以確保方法的可靠性。
分析方法驗(yàn)證—主要內(nèi)容? 主要內(nèi)容：
? 1.法規(guī)要求
? 2.定義、適用范圍、目的和發(fā)起時(shí)機(jī)
? 3.驗(yàn)證的分析項(xiàng)目
? 4.驗(yàn)證的指標(biāo)
? 5.舉例（略）
第十二條 質(zhì)量控制的基本要求：
（四）檢驗(yàn)方法應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證或確認(rèn)；
第一百三十九條 企業(yè)的廠房、設(shè)施、設(shè)備和檢驗(yàn)儀器應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)確認(rèn)，應(yīng)當(dāng)采用經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的生產(chǎn)工藝、操作規(guī)程和檢驗(yàn)方法進(jìn)行生產(chǎn)、操作和檢驗(yàn)，并保持持續(xù)的驗(yàn)證狀態(tài)。
第一百四十二條 當(dāng)影響產(chǎn)品質(zhì)量的主要因素，如原輔料、與藥品直接接觸的包裝材料、生產(chǎn)設(shè)備、生產(chǎn)環(huán)境（或廠房）、生產(chǎn)工藝、檢驗(yàn)方法等發(fā)生變更時(shí)，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行確認(rèn)或驗(yàn)證。必要時(shí)，還應(yīng)當(dāng)經(jīng)藥品監(jiān)督管理部門(mén)批準(zhǔn)。
第一百四十三條 清潔方法應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，證實(shí)其清潔的效果，以有效防止污染和交叉污染。清潔驗(yàn)證應(yīng)當(dāng)綜合考慮設(shè)備使用情況、所使用的清潔劑和消毒劑、取樣方法和位置以及相應(yīng)的取樣回收率、殘留物的性質(zhì)和限度、殘留物檢驗(yàn)方法的靈敏度等因素。
分析方法驗(yàn)證—法規(guī)要求（2/3）第一百四十九條 應(yīng)當(dāng)根據(jù)驗(yàn)證的結(jié)果確認(rèn)工藝規(guī)程和操作規(guī)程。
第二百二十三條 物料和不同生產(chǎn)階段產(chǎn)品的檢驗(yàn)應(yīng)當(dāng)至少符合以下要求：
（一）企業(yè)應(yīng)當(dāng)確保藥品按照注冊(cè)批準(zhǔn)的方法進(jìn)行全項(xiàng)檢驗(yàn)；
（二）符合下列情形之一的，應(yīng)當(dāng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證：
1.采用新的檢驗(yàn)方法;
2.檢驗(yàn)方法需變更的；
3.采用《中華人民共和國(guó)藥典》及其他法定標(biāo)準(zhǔn)未收載的檢驗(yàn)方法；
4.法規(guī)規(guī)定的其他需要驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法。
（三）對(duì)不需要進(jìn)行驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法，企業(yè)應(yīng)當(dāng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)，以確保檢驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可靠；
（四）檢驗(yàn)應(yīng)當(dāng)有書(shū)面操作規(guī)程，規(guī)定所用方法、儀器和設(shè)備，檢驗(yàn)操作規(guī)程的內(nèi)容應(yīng)當(dāng)與經(jīng)確認(rèn)或驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法一致；
分析方法驗(yàn)證—法規(guī)要求（3/3）第二百三十條 產(chǎn)品的放行應(yīng)當(dāng)至少符合以下要求：
（一）在批準(zhǔn)放行前，應(yīng)當(dāng)對(duì)每批藥品進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，保證藥品及其生產(chǎn)應(yīng)當(dāng)符合注冊(cè)和本規(guī)范要求，并確認(rèn)以下各項(xiàng)內(nèi)容：
1.主要生產(chǎn)工藝和檢驗(yàn)方法經(jīng)過(guò)驗(yàn)證；
分析方法驗(yàn)證—定義、適用范圍、目的和發(fā)起時(shí)機(jī)（1/2）? 方法驗(yàn)證定義
? 國(guó)際：ICHQ2（R1）：是闡明分析方法適用于它所期望的應(yīng)用目的。
? 美國(guó)：FDA工業(yè)指南/USP（1225）
FDA:是一個(gè)闡述分析方法適合于其使用目的的過(guò)程。
USP：是一個(gè)按照已創(chuàng)建的實(shí)驗(yàn)室研究來(lái)證明方法的性能參數(shù)符合期望的分析應(yīng)用的過(guò)程。
? 國(guó)內(nèi)：SFDA/ChP
SFDA:證明任何操作規(guī)程（或方法），生產(chǎn)工藝或系統(tǒng)能夠達(dá)到預(yù)期結(jié)果的一系列活動(dòng)。
ChP（9101）：證明采用的方法適合于相應(yīng)的要求。
1.任何分析檢測(cè)的目的都是為了獲得穩(wěn)定、可靠和準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，方法驗(yàn)證在其中起著極為重要的作用。
2.是對(duì)標(biāo)準(zhǔn)中擬采用的分析方法是否能達(dá)到預(yù)期目的。
3.證明由分析方法誤差而導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果判斷錯(cuò)誤的概率是否在允許范圍之內(nèi)，而進(jìn)行的科學(xué)證明。
分析方法驗(yàn)證—定義、適用范圍、目的和發(fā)起時(shí)機(jī)（2/2）? 適用范圍、目的和發(fā)起時(shí)機(jī)內(nèi)容 適用范圍 目的 發(fā)起時(shí)機(jī)
方法驗(yàn)證 1.采用新的檢驗(yàn)方法；2.檢驗(yàn)方法需變更的；3.采用《中國(guó)藥典》及其他法定標(biāo)準(zhǔn)未收載的檢驗(yàn)方法；4.法規(guī)規(guī)定的其他需要驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法；
證明采用方法適合相應(yīng)檢測(cè)要求
1.創(chuàng)建質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)；2.在藥品生產(chǎn)工藝變更、制劑的組分變更、原分析方法修訂時(shí)；
方法確認(rèn) 1.不需要進(jìn)行驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法；2.藥典方法和其他法定方法；
確認(rèn)方法在本實(shí)驗(yàn)室條件下的適用性
在實(shí)驗(yàn)室批準(zhǔn)使用該方法前
方法轉(zhuǎn)移 將分析方法由A實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)移到B實(shí)驗(yàn)室
確認(rèn)采用的方法在B實(shí)驗(yàn)室條件下的適用性
在B實(shí)驗(yàn)室批準(zhǔn)使用該方法前
分析方法驗(yàn)證—驗(yàn)證的分析項(xiàng)目? 需要驗(yàn)證的分析項(xiàng)目：鑒別試驗(yàn)、雜質(zhì)測(cè)定（限度或定量分析）、含量測(cè)定和特性參數(shù)
（如：溶出度、釋放度、含量均勻度等）
? 鑒別的目的在于判定被分析物是目標(biāo)化合物，而非其他物質(zhì)。用于鑒別的分析方法要求具有較強(qiáng)的專(zhuān)屬性和耐用性。
? 雜質(zhì)檢查主要用于控制主成分以外的雜質(zhì)，如無(wú)機(jī)、有機(jī)雜質(zhì)等。雜質(zhì)檢查分為限度檢查和定量測(cè)定兩部分。用于限度檢查的分析方法驗(yàn)證側(cè)重專(zhuān)屬性、檢測(cè)限和耐用性。用于定量測(cè)定的分析方法驗(yàn)證強(qiáng)調(diào)專(zhuān)屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性、范圍、定量限和耐用性。
? 含量測(cè)定對(duì)準(zhǔn)確度要求較高，因此所采用的分析方法要求具有一定的專(zhuān)屬性、準(zhǔn)確度和線性等的要求。
? 不需要驗(yàn)證的分析項(xiàng)目：對(duì)于僅需要按照實(shí)驗(yàn)室日常測(cè)試操作步驟即可測(cè)定的檢驗(yàn)項(xiàng)目不需要進(jìn)行驗(yàn)證，如外觀、崩解時(shí)限、密度、重量、pH值、灰分、裝量等等。
分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（內(nèi)容）? 驗(yàn)證的指標(biāo)：
? 專(zhuān)屬性
? 準(zhǔn)確度
? 精密度（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）
? 檢測(cè)限
? 定量限
? 線性
? 范圍
? 耐用性
分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（項(xiàng)目與指標(biāo)關(guān)系表）? 分析項(xiàng)目與相應(yīng)的驗(yàn)證指標(biāo)見(jiàn)下表：
分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（專(zhuān)屬性）? 專(zhuān)屬性：系指在其他成分（如雜質(zhì)、輔料等）可能存在下，采用的分析方法能正確測(cè)定出被測(cè)物
的能力。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定方法，均應(yīng)考察其專(zhuān)屬性。
? 評(píng)價(jià)方法：
1.分離度：以分離度（試驗(yàn)）溶液試驗(yàn)，分離度應(yīng)符合要求；
2.陰性試樣：以不含被測(cè)成分的供試品（除去含待測(cè)成分藥物或不含待測(cè)成分的模擬處方，通常稱為陰性試驗(yàn)）試驗(yàn)
3.共存物：在共存物（或雜質(zhì)）可獲得的情況下，試樣中可加入共存物，考察測(cè)定結(jié)果是否受干擾；
4.方法比較：測(cè)定可能含有共存物如雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的供試品，與用另一個(gè)經(jīng)驗(yàn)證的方法或藥典方法測(cè)定結(jié)果比較；
5.色譜峰純度：用光二極管陣列檢測(cè)器（DAD）和質(zhì)譜檢測(cè)器進(jìn)行峰純度檢查；
分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（準(zhǔn)確度）? 準(zhǔn)確度:系指用所創(chuàng)建的方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率（%）表
示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的線性范圍內(nèi)測(cè)定試驗(yàn)。準(zhǔn)確度也可由所測(cè)定的精密度、線性和專(zhuān)屬性推算出來(lái)。
? 評(píng)價(jià)方法：（化學(xué)藥含量測(cè)定、化學(xué)藥雜質(zhì)定量、中藥化學(xué)成分測(cè)定的準(zhǔn)確度）
1.加樣回收（回收率試驗(yàn)是評(píng)價(jià)準(zhǔn)確度最為常用、較為簡(jiǎn)單的方法之一）：（1）模擬樣品（空白輔料和對(duì)照品）；（2）標(biāo)準(zhǔn)加入法（在樣品中加入對(duì)照品）；
2.非加樣回收（在無(wú)法或無(wú)必要加樣回收試驗(yàn)）：（1）測(cè)試對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）；（2）由精密度、線性和專(zhuān)屬性數(shù)據(jù)來(lái)評(píng)價(jià)；（3）與已知準(zhǔn)確度的標(biāo)準(zhǔn)方法比較；
? 數(shù)據(jù)要求：
1.用同一濃度平行6份測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)；或高、中、低3個(gè)不同濃度，分別制備3份供試品溶液，用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。
2.應(yīng)報(bào)告已知加入量的回收率（%），或測(cè)定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差或置信區(qū)間（置信度一般為95%）。
3.在基質(zhì)復(fù)雜、組分含量低于0.01%及多成分等分析中，回收率限度可適當(dāng)放寬。
4.樣品中待測(cè)定成分含量與回收率限度表（略）—來(lái)源為美國(guó)藥典論壇PF39（6）（1200）中，準(zhǔn)確度可接受標(biāo)準(zhǔn)公式為：回收率=100%±2C – 0 . 1 5 0 5%，其中C為待測(cè)成分含量。（美國(guó)AOAC指導(dǎo)原則）
分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（精密度）? 精密度：系指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一份均勻的供試品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近
程度。精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性。
? 評(píng)價(jià)方法：
1.重復(fù)性：a.在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度（相當(dāng)于100%濃度水平）的供試品，用至少測(cè)定6次的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)；b.設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度分別制備3份供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)（考慮樣品濃度范圍）；
2.中間精密度：為考察隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響。變動(dòng)因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備。
3.重現(xiàn)性：通過(guò)不同實(shí)驗(yàn)室協(xié)同檢驗(yàn)獲得重現(xiàn)性結(jié)果。
?數(shù)據(jù)要求：
1.應(yīng)報(bào)告偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差或置信區(qū)間。
2.樣品中待測(cè)定成分含量和精密度RSD可接受范圍參考表（略），計(jì)算公式，重復(fù)性：RSD r=C – 0 . 1 5 0 5；重現(xiàn)性：RSDR=2C – 0 . 1 5 0 5，其中C為待測(cè)定成分含量（公式來(lái)源美國(guó)AOAC指導(dǎo)原準(zhǔn)則）。可接受范圍可在給出數(shù)值0.5—2倍區(qū)間。
3.在基質(zhì)復(fù)雜、組分含量低于0.01%及多成分等分析中，精密度限度可適當(dāng)放寬。
分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（檢測(cè)限和定量限）? 檢測(cè)限（LOD）：系指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量，不必準(zhǔn)確定量。
? 定量限（LOQ）：系指試樣中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)符合準(zhǔn)確度和精密度要求。
? 評(píng)價(jià)方法：
1.直觀法：用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出被可靠地檢測(cè)（定量）的最低濃度和量。
2.信噪比法：一般以信噪比為3:1或10:1時(shí)相對(duì)應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限和定量限。
3.基于響應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率法。（公式略）
分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（線性）? 線性：系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，檢測(cè)結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈比例關(guān)系的程度。
? 評(píng)價(jià)方法：
1.應(yīng)在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)測(cè)定線性關(guān)系。
2.可用同一對(duì)照品（或工作對(duì)照品）貯備液經(jīng)精密稀釋?zhuān)蚍謩e精密稱取同一對(duì)照品（或工作對(duì)照品），制備一系列對(duì)照品（或工作對(duì)照品）溶液的方法進(jìn)行測(cè)定，至少制備5份測(cè)試樣品。以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。
?數(shù)據(jù)要求：
1.線性范圍要足夠?qū)挘员ＷC供試品溶液中待測(cè)成分的濃度（或量）落在線性范圍內(nèi)，且最好處于線性曲線的中間部分。
2.線性范圍最低點(diǎn)的濃度不得低于方法的定量限。
3.常量測(cè)定：回歸曲線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.998，Y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的2%以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。
4.微量測(cè)定：回歸曲線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.990，Y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的25%以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10%。
5.應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)、各濃度點(diǎn)誤差、殘差平方和和線性圖（或其他數(shù)學(xué)模型）。
分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（范圍）? 范圍：系指分析方法能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性要求時(shí)高低限濃度或量的區(qū)間。
? 確定依據(jù)：a.應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用及其線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果和要求確定。b.線性范圍應(yīng)足夠?qū)挘瑧?yīng)能覆蓋實(shí)際供試品的全部待測(cè)濃度，和準(zhǔn)確度、精密度試驗(yàn)的濃度范圍。
1.原料藥和制劑含量測(cè)定，范圍一般為測(cè)定濃度的80%—120%；
2.制劑含量均勻度檢查，范圍一般為測(cè)定濃度的70%—130%；
3.溶出度和釋放度中的溶出量測(cè)定，范圍一般為限度的±30%，如規(guī)定了限度范圍，則應(yīng)為下限的-20%至上限的+20%；
4.雜質(zhì)測(cè)定，范圍應(yīng)根據(jù)初步實(shí)際測(cè)定數(shù)據(jù)，擬定為規(guī)定限度的±20%。
分析方法的驗(yàn)證—驗(yàn)證的指標(biāo)（耐用性）? 耐用性：系指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，為所創(chuàng)建的方法用于常
規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。
? 評(píng)價(jià)方法：
1.創(chuàng)建分析方法時(shí)，就應(yīng)考慮其耐用性。
2.如果測(cè)試條件要求苛刻，則應(yīng)在方法中寫(xiě)明，并注明可以接受變動(dòng)的范圍。
3.先采用均勻設(shè)計(jì)確定主要影響因素，再通過(guò)單因素分析等確定變動(dòng)因素。
?典型的變動(dòng)因素：
1.被測(cè)溶液的穩(wěn)定性、提取的完全性；
2.色譜系統(tǒng)的耐用性：色譜柱的變化、柱溫、緩沖液濃度的變化、組分變化、pH值的變化、流速等；
?結(jié)果要求：經(jīng)試驗(yàn)，測(cè)定條件小的變動(dòng)應(yīng)能滿足系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求，以確保方法的可靠性。
